C14-4

Биологическая активность

C14-4 (C14-494, Lipid B-4, Lipid B4) представляет собой новый ионизируемый липид с самой высокой эффективностью трансфекции Т-клеток и низкой цитотоксичностью. Ионизируемый липид C14-4 был исследован для терапии CAR-T. Для скрининга превосходных составов для доставки мРНК была создана липидная библиотека из 24 ионизируемых липидов для создания iLNP, которые использовались для доставки люциферазы. мРНК в клетки Jurkat.[115] Оптимальным составом iLNP были iLNP C14-4 (ионизируемый липид C14-4, DOPE, хол и ПЭГ в молярном соотношении 35%, 16%, 46,5% и 2,5%) (рис. 6c). Оптимальная доза мРНК люциферазы для iLNP C14-4 составила 30 нг. По сравнению с электропорированными Т-клетками CAR, Т-клетки CAR, сконструированные с помощью iLNP C14-4, продемонстрировали мощную противораковую активность при совместном культивировании с клетками острого лимфобластного лейкоза Nalm-6. Чтобы получить более безопасный и более эффективный носитель доставки мРНК CAR, ортогональный дизайн предоставил 256 потенциальных составов, и были оценены 16 репрезентативных составов iLNP. Путем оценки безопасности, эффективности доставки и эффективности трансфекции 16 iLNP, состав B10 (ионизируемый липид C14-4, DOPE, хол, PEG в молярном соотношении 40%, 30%, 25% и 2,5%) был выбран как наиболее эффективный состав. Экспрессия люциферазы на основе состава B10 была увеличена в три раза по сравнению с исходным составом. Уменьшение накопления и клиренса iLNP в печени может увеличить экспрессию мРНК CAR в Т-клетках, еще больше улучшая терапевтический эффект CAR-T. Исследования показали, что аналоги холестерина могут изменять механизмы внутриклеточной циркуляции и усиливать доставку мРНК, что может быть связано со снижением распознавания iLNP ферментом Нимана Пика C1 (NPC1). Добавление гидроксильной группы в различные места молекулы холестерина может изменить кинетику связывания модифицированного холестерина с NPC1 и снизить узнавание холестерина NPC1. Результаты показали, что замена 25% и 50% 7-α-гидроксихолестерина на холестерин в iLNP улучшает доставку мРНК к первичным Т-клеткам человека in vitro в 1,8 и в два раза соответственно. C14-4 является одним из ионизируемых липидов для эффективной доставки мРНК в клетки Jurkat или первичные Т-клетки человека. Это будет эффективно способствовать развитию доставки мРНК с помощью iLNP для терапии CAR-T.