4A3-SC8

Биологическая активность

4A3-SC8 — это новый ионизируемый аминолипид для доставки РНК. Система редактирования генов CRISPR-Cas9 стала горячей точкой в ​​области генной терапии, особенно в коррекции генов, индуцированной репарацией, направленной на гомологию (HDR). Однако его применение имеет различные препятствия, такие как большая молекулярная масса, плохая стабильность, риск нецелевого использования и сложность множественных генов кодевера. Фарбиак и др. создали новую библиотеку ионизируемых липидов, состоящую из четырех различных аминных ядер (3A3, 3A5, 4A1, 4A3) и девяти периферий с различной длиной алкильной цепи (SC5-SC14), и выявили класс iLNP со способностью инкапсулировать мРНК Cas9, sgRNA и донорскую ДНК одновременно. Эффективность доставки (количественно выраженную по экспрессии мРНК люциферазы) и токсичность iLNP оценивали с использованием трех различных клеточных линий (HEK293T, HeLa и IGROV-1), что указывает на то, что состав, содержащий 4A3-SC8, был лучшим. iLNP 4A3-SC8 успешно индуцировали HDR в клетках HEK293 путем доставки мРНК Cas9, sgRNA и правильной матрицы оцДНК в одном горшке. Конфокальная микроскопия показала, что часть синей флуоресценции в клетках была исправлена ​​на зеленую флуоресценцию. Кроме того, соотношение нуклеиновых кислот Cas9: sgRNA: загрузка донорской ДНК в iLNP в соотношении 2:1:3 может максимизировать эффективность HDR с эффективностью редактирования до 23%, что преодолевает нынешнее узкое место эффективности HDR, составляющее всего 1–5%. Этот прогресс, несомненно, является важным достижением в области генной терапии для лечения заболеваний, вызванных генетическими мутациями.